Termofilik anoxybacillus amylolyticus bakterisinin gchı geninin klonlanması ve enzimin biyokimyasal karakterizasyonu
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji (Yl), Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2020
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: MURİDE KALEMCİ
Danışman: Fatih Şaban Beriş
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışma, fenilketonüri metabolizmasında görevli birinci enzim olan GTP siklohidrolaz I'in termofilik Anoxybacillus amyloliticus bakterisinden klonlanmasını, ekspresyonunu ve enzimin saflaştırılarak biyokimyasal karakterizasyonunu içermektedir. A. amyloliticus bakterisinden PZR ile tespit edilen gchI geni 561 baz çifti büyüklüğünde toplam 186 amino asidi kodlayan tek bir açık okuma dizisidir. GTP'den dihidroneopterin trifosfat dönüşümünü katalizleyen enzim gen ekspresyonu pET28a(+) vektörüne klonlandıktan sonra E. coli BL21(DE3)pLysS hücresinde 1 mM IPTG ile indüksiyonu sağlandı. Enzimin saflaştırılması için Ni-NTA afinite kolonu kullanıldı. Yapılan karakterizasyon çalışmaları sonucunda enzimin Vmax'ı 6,9x10-5 ± 2,3x10-4 µM/dk/mg protein ve Km'si 7,0 ± 1,4 mM olarak bulundu. Enzim en iyi aktivite gösterdiği sıcaklık değeri 70C ve en uygun pH değeri ise 7,0 olarak belirlendi.