Karaca Mersini (Acipenser gueldenstaedtii) Solungacından Karbonik Anhidrazın Karakterizasyonu
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya (Yl), Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2013
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: Gülay Candan
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): BARBAROS DİNÇER
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışmada Karaca Mersini'nin (Acipenser gueldenstaedtii) dokularında karbonik anhidraz (CA) enzimi karakterize edildi. Balığın kalp, beyin, solungaç homojenatlarında ve eritrosit hemolizatında karbonik anhidrazın hidrataz aktivitesi sırasıyla 2,5, 7,4, 5,2, 10,8 EU/mg protein olarak belirlendi. Balığın solungacından karbonik anhidraz enzimi Sepharose-4B-L tirozin-sülfanilamid kolonunda 66 kat ve 20,7 verimle saflaştırılarak spesifik aktivitesi 222,2 EU/mg protein olarak tespit edildi.Enzimin saflığına sodyum dodesilsülfat poliakrilamid (SDS-PAGE) jel elektroforezinde gözlenen tek protein bandı ile karar verildi. SDS-PAG Elektroforezi sonucunda Karaca Mersini solungaçlarından saflaştırılan karbonik anhidrazın altbirim molekül kütlesi yaklaşık olarak 20 kDa olarak bulundu. Enzimin p-nitrofenil asetat substratı varlığında esteraz aktivitesinin pH 6,0'da ve 40 oC sıcaklıkta en yüksek olduğu tespit edildi. Solungaç karbonik anhidrazının Km ve Vmax kinetik değerlerini p-nitrofenol asetat (p-NFA) substratı kullanılarak Lineweaver-Burk grafiğinden hesaplandı ve KM 2,5 mM ve Vmaks 5x106 ? M/dak olarak belirlenmiştir. Enzimin p-NFA'a karşı etkinliğini belirten kcat değeri 134408,6 s-1 ile kcat/KM değeri 53763,4 mM-1s-1olarak bulundu. Solungaç CA'sının sülfanilamid ve asetazolamid inhibitörlerine karşı 13 ve 0,1 ? M gibi oldukça düşük IC50 değerine sahip olduğu tespit edildi. Ayrıca enzimin Zn+2 ile Ba+2 varlığında 1,1 mM, Fe+2 varlığında 0,2 mM, Co+2 varlığında 1,7 mM ve Ni +2 varlığında 1,2 mM IC50 değerleriyle inhibe olduğu belirlendi.Anahtar Kelimeler: Karbonik anhidraz, Karaca Mersini balığı, Acipenser gueldenstaedtii