Geobacillus stearothermophilus AH22 suşundan lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya (Dr), Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2015
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: Arife Pınar Ekinci
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): BARBAROS DİNÇER
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışmada, yeni izole edilmiş ve termofilik bir bakteri olan Geobacillus stearothermophilus AH22 suşundan endüstriyel bir enzim olan lipaz, iyon değişim kromatografisi ve jel filtrasyon kromatografisi kullanılarak kısmi olarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. Lipaz enzimi %19.7 verimle 18.3 kat saflaştırılarak elde edildi. Kısmi saflaştırılmış lipaz enziminin moleküler ağırlığı SDS-PAGE kullanılarak yaklaşık 26 kDa olarak belirlendi. Enzim p-nitrofenil asetat, p-nitrofenil bütirat, p-nitrofenil oktaonat ve p-nitrofenil laurat substratları varlığında karakterize edildi. Enzimin Km ve Vmaks değerleri p-nitrofenil asetat, p-nitrofenil bütirat, p- nitrofenil oktaonat ve p- nitrofenil laurat substratları varlığında Lineweaver-Burk eğrisi yardımıyla belirlendi. Enzimin Km değerleri sırasıyla 0.16, 0.02, 0.19 ve 0.55 mM olarak, Vmaks değerleri ise sırasıyla 0.52 EU mg−1, 1.03 EU mg−1, 0.72 EU mg−1 ve 0.15 EU mg−1 olarak hesaplandı. Enzimin kullanılan substratlar varlığında en yüksek aktiviteyi 50 ile 60 oC' de ve pH 8 ile 9' da gösterdiği tespit edildi. Enzimin 50 ile 60 °C arasında termal kararlığının, +4 °C' de pH 8.0-10.0 aralığında ise pH karalılığının oldukça iyi olduğu gözlendi. Lipaz aktivitesine bazı metal tuzlarının ve bileşiklerin etkisi incelendi. Enzim aktivitesini en fazla Hg2+ iyonunun inhibe ettiği tespit edildi. Bununla birlikte orlistat, kateşin, propil paraben, p-kumarik asit ve 3,4- dihidroksi hidrosinamik asit inhibitörlerinin IC50 değerleri sırasıyla 0.0085, 0.06, 0.5, 1.25 ve 1.7 mM olarak belirlendi. Bu sonuçlar, Geobacillus stearothermophilus AH22 lipazının ısıl ve pH kararlılığı ve diğer özellikleri açısından endüstriyel uygulamalar için oldukça elverişli özelliklere sahip olduğunu göstermektedir. Anahtar kelimeler: Geobacillus stearothermophilus AH22, Lipaz, Saflaştırma,Karekterizasyon