Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2019
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: MERVE KIZAKLI
Danışman: Hakan Karaoğlu
Özet:
Glukozun fruktoza isomerizasyonunu katalizleyen glukoz izomeraz (D- xylose ketol - isomerase E.C 5.3.1.5) birçok mikroorganizmada bulunmaktadır. Günümüze kadar birçok termofilik bakteriden GI’ lar karakterize edilerek birçoğu endüstriyel alanlarda kullanılır hale getirilmiĢtir. Ayrıca endüstriyel alanlarda kullanılmak üzere birçok GI geni biyomühendislik uygulamaları ile mutant hale getirilerek GI’ ın hem kinetik hem de biyokimyasal parametrelerinin geliĢtirilmesi üzerine birçok çalıĢma yapılmıĢtır. Anoxybacillus gonensis G2T glukoz izomerazı rekombinant olarak izole edilmiĢtir. Elde edilen veriler sonucunda; Anoxybacillus gonensis G2T glukoz izomerazının kinetik parametreler açısından ticari olarak kullanılan birçok GI’ dan üstün nitelikler taĢıdığı belirlenmiĢtir. Bu çalıĢmada, genetik manipülasyonlarla kinetik özellikleri geliĢtirilmiĢ olan AgoGI’ sının yine aynı yöntemler ile biyokimyasal ve kinetik parametrelerinin geliĢtirilmesi amaçlanmaktadır. Bu amaçla AgoGI’ sı üzerinde I323V, I372V, I372Q, V380F, D398S, bölge spesifik mutasyonları uygulanmıĢtır. Ayrıca, baĢarılı sonuç alınan I373V ve V380F mutasyonları kinetik parametreler açısından geliĢtirilmiĢ olan enzimin W137F/ V184S mutantı üzerinde de uygulanmıĢtır. W137F/ V184S/I372V’ ye ait kinetik veriler; Km değeri 64,37 ± 1,3 mM, Vmax değeri 99,05 ± 0,44, kcat değeri 82,62 1/sn ve kcat/ Km değeri 1,283 olarak hesaplanmıĢtır. W137F/ V184S/W380F’ ye ait kinetik veriler ise Km değeri 116,57 ± 4,37 mM, Vmax değeri 37,22 ± 0,39 µmol/dk/mg protein, kcat değeri 31,05 1/sn ve kcat/ Km değeri 0,266 olarak hesaplandı.